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单宁含量检测试剂盒操作原理是什么!

单宁含量检测试剂盒操作原理是什么!

 

简介:

单宁是葡萄酒中所含有的两种酚类化合物其中的一种物质,尤其在红葡萄酒中含量较多,有益于心脏血管疾病的预防。葡萄酒中的单宁一般是由葡萄籽、皮及梗浸泡发酵而来,或者是因为存于橡木桶内而萃取橡木内的单宁而来。单宁的多少可以决定酒的风味、结构与质地。缺乏单宁的红酒质地轻薄,没有厚实的感觉,薄若莱红酒就是典型代表。单宁丰富的红酒可以存放经年,并且逐渐酝酿出香醇细致的陈年风味。当葡萄酒入口后口腔感觉干涩,口腔黏膜会有褶皱感,那便是单宁在起作用。

 

产品说明:
单宁是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物,又称植物多酚。具有独特的化学性质和多种生理活性,如能与蛋白质、生物碱、多糖结合;能与多种金属离子发生络合或静电作用;具有止血、抑制微生物、抗过敏、抗突变、抗肿瘤、抗衰老等生理活性。单宁在碱性环境下与磷钼酸反应,生成蓝色化合物,在760nm 处有大吸收峰。

 

检测原理:

测定原理:单宁在碱性环境下与磷钼酸反应,生成蓝色化合物,在760nm 处有大吸收峰。

 

需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。

 

操作步骤:
一、 单宁的提取:
按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL蒸
馏水),充分匀浆后转移到EP 管中,80℃水浴提取30min,8000 g,25℃离心10 min,取上清液待
测。

二、 测定步骤:
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至760nm,蒸馏水调零;试剂一和试剂二37℃预热10min
以上。

混匀,室温静置30min,760nm 处读取吸光值A,ΔA=A 测定-A 对照,对照管只要做一管。

 

三、 单宁含量计算:

1、 标准条件下测定的回归方程为y = 0.008x - 0.0021;x 为标准品浓度(μg/mL),y 为吸光值。

2、 按样本鲜重计算:
单宁含量(μg /g 鲜重)= [(ΔA+0.0021) ÷0.008×V1]÷(W×V1÷V2)=125×(ΔA+0.0021) ÷W。

3、 按样本蛋白浓度计算:
单宁含量(μg /mg prot)= [(ΔA+0.0021) ÷0.008×V1]÷(V1×Cpr)=125×(ΔA+0.0021) ÷Cpr。
V1:加入样本体积,0.015mL;V2:加入提取液体积,1mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;
W:样本鲜重,g。

 

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