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孕酮(PROG)放免试剂盒实验过程中应该注意哪些!

孕酮(PROG)放免试剂盒实验过程中应该注意哪些!

 

孕酮是由卵巢黄体分泌的一种天然孕激素,在体内对雌激素激发过的子宫内膜有显著形态学影响,为维持妊shen所必需。黄ti酮临床用于先兆性LIU产、习惯性LIU产等闭经或闭经原因的反应性诊断等。

 

[使用目的]
用于定量测定人血清(或血浆)中孕酮(PROG)的浓度。

 

[用途]
孕酮是一种含 21 碳原子的重要雌性激素,主要由卵巢,肾上腺和妊shen时胎盘产生。孕酮在血液循环中代谢很快,半衰期为 5 分钟,产物为孕二醇,孕二醇在肝脏内与葡萄糖醛酸结合成水溶性的葡萄糖醛酸孕二醇,经肾脏排出,其生理作用是保证受精卵着床和维持妊shen。临床上孕酮的测定主要用于确定排卵,孕激素治疗监测和早期妊shen状态的评价以及在判断黄体功能状态方面等具有重要意义。本品采用了第二抗体+聚已二醇沉淀法放射免疫分析试验原理:含孕酮(PROG)的样品和 125I 标记的孕酮衍生物与相应的抗体反应形成抗原抗体复合物。反应后加入二抗及PEG,使免疫复合物沉淀,离心,测沉淀放射性计数。通过标准曲线得到样本中孕酮(PROG)的浓度。

 

[实验方法]
A B C D E F G (单 位)
0 0.3 1.1 3.5 10 20 80 ng/mL
1、 将实验所需试剂及样本放置室温,平衡至少 30 分钟以上才可进行操作;
2、 取 60X12mm 聚苯乙烯管进行编号,所有实验均做双管重复;
3、 取每个浓度的标准品、质控血清和样本 100µl 加入相应编号的试管中;
4、 每管均各加入 200µl 标记物工作液;
5、 每管均各加入 200µl 抗体工作液,充分混匀;
6、 37℃温育 1.0 小时;
7、 每管均各加入 1000µl 分离剂后,充分混匀;
8、 室温放置 5~10 分钟后,离心 3500 转/分,20 分钟后,吸去或倾倒掉上清液;
9、 用 γ-计数器测定各管计数CPM。 推荐检测时间: 1 分钟
10、 从标准曲线上读取样本及质控血清的浓度。

 

[实验过程中应注意]
1、 γ-计数器本底计数应≤100CPM/分,效率应≥75%;
2、 加入放射性标记物时,应做好防护、小心谨慎,以避免造成放射性污染;
3、 如果某一个样本的测定值高于zui高浓度的标准品浓度,用零标准品以 1:2 或 1:
4 的比例稀释样本后重新测试,测试结果乘以相应的稀释倍数。

 

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